双色荧光观察是一种通过同时检测两种不同波长的荧光信号，对生物样本进行多参数分析的技术。该技术在细胞动态追踪、蛋白质相互作用研究等领域具有重要意义。

西格玛光机通过其分光镜、滤光片观察套件及同轴照明观察系统，为双色荧光观察提供了高精度解决方案。

一、双色荧光观察的原理

双色荧光观察的核心在于分离不同波长的激发光与发射光。其流程包括：

激发阶段：使用特定波长的激发光（如488nm和561nm）分别激发样本中的两种荧光探针。

分光与过滤：通过分光镜将混合的荧光信号按波长分离，再经发射滤光片进一步纯化信号，避免交叉干扰。

同步成像：分离后的信号由相机同步捕获，生成双通道图像，用于后续叠加分析。

二、西格玛光机的关键技术组件

分光镜

西格玛光机提供多种分光镜，包括偏光分光镜（PBS）、非偏光分光镜（NPCH）和多层电介质膜立方体分光镜（CSM）等，分别适用于不同实验条件。

偏光平板分光镜（PBS）

非偏光立方体半反射镜（NPCH）

多层电介质膜立方体分光镜（CSM）

荧光滤光片套件

西格玛光机的荧光观察滤光片套件（高画质图像）包含激发光用滤光片(Ex）、吸收滤光片（Em）和分光镜(DM），能精确匹配荧光探针的激发/发射波长，减少背景噪声，提升信噪比。例如，在双色实验中，滤光片组可分别筛选出两种探针的特定信号。

同轴照明观察系统

西格玛的同轴照明观察系统支持高倍率观察，并可通过C型接口连接摄像头，适配多波长光源和分光组件，便于集成双色成像模块。

三、应用案例：

斑马鱼双色成像研究

在斑马鱼发育研究中，双色荧光技术被用于同时标记不同细胞类型。

例如，北京大学的研究团队曾搭建双光子光片成像系统，采用双色分光器（如滨松W-View Gemini）同步捕获红色（标记红细胞）与绿色（标记胰岛细胞）荧光信号。

细胞动态追踪实验

在活细胞双色成像中，研究人员可通过西格玛光机的立方体分光镜（CSMH）和滤光片套件，同步捕获绿色（如GFP，发射波段500-550nm）与红色荧光（如mCherry，发射波段600-650nm）。该系统兼容激光光源与LED光源，支持长时间动态观察。

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